La serie gira alrededor del Dr. Gregory House, un misántropo genio de la medicina, ególatra y de fuerte y marcada personalidad que dirige el Departamento de Diagnóstico Médico del ficticio Hospital Universitario Princeton-Plainsboro de Nueva Jersey, dirigido por la Dra. Lisa Cuddy.79 Tiene dos especialidades, una en enfermedades infecciosas y otra en nefrología.

Su departamento de diagnóstico lo conforman tres o cuatro médicos, además de él mismo, según la temporada. Inicialmente el equipo estaba integrado por Eric Foreman, Allison Cameron y Robert Chase. Luego los integrantes del equipo cambian, integrándolo los doctores Eric Foreman, Lawrence Kutner, Remy Hadley y Chris Taub. Ocasionalmente se agrega uno de sus pocos amigos, el jefe de Oncología del hospital James Wilson.

Al departamento de diagnóstico se le asignan casos complejos a los que House se suele enfrentar de forma impersonal, evitando el trato directo con los pacientes, siempre que pueda. House considera que la gente tiende a mentir ("todo el mundo miente") y que esa actitud complica o impide descubrir la verdad. Por regla general, en cada capítulo el equipo debe diagnosticar un caso difícil y para ello atraviesa todo un proceso investigativo lógico-empírico, exponiendo y descartando diversas hipótesis, a medida que los hechos se van sucediendo, hasta resolverlo.

House es adicto a la hidrocodona (vicodina) a causa de un dolor crónico en la pierna derecha derivado de una necrosis muscular (causada por un aneurisma) y tiene un carácter misántropo, pero posee un gran sentido del sarcasmo y la ironía. Demuestra falta de respeto por las normas, procedimientos y protocolos establecidos y escaso interés en llevar a cabo otras tareas médicas diferentes a la resolución de casos complejos.